El Laboratorio de Metabolismo Celular y Mitocondrial está equipado con un Analizador Seahorse XF Pro. Este equipo, mide e informa la tasa de consumo de oxígeno (OCR), la tasa de salida de protones (PER) o la tasa de acidificación extracelular (ECAR), así como las tasas de producción de ATP de células vivas en un formato de 96 pocillos. Este analizador presenta una excelente precisión de OCR a tasas bajas, rendimiento verificado del instrumento, control de temperatura optimizado y está habilitado para la automatización. Las tasas de producción de OCR, PER y ATP son medidas críticas del metabolismo energético e indicadores vitales de la salud mitocondrial, la toxicidad, la glicólisis y la disfunción celular en general. Juntas, estas mediciones brindan una vista a nivel de sistemas de la función metabólica celular en células cultivadas y muestras ex vivo. El analizador XF Pro también está equipado con software avanzado, flujos de trabajo estandarizados y análisis de datos avanzados disponibles en el software Agilent Seahorse Analytics. Estas funciones simplifican en gran medida toda la experiencia del ensayo XF, desde el diseño del ensayo hasta el control de calidad y la interpretación de los datos.
• Célula viva, análisis en tiempo real de la plataforma de metabolismo energético celular en formato de 96 pocillos.
• Múltiples parámetros informados de cada pocillo de ensayo, incluidos OCR, PER o ECAR, y tasas de producción de ATP.
• Excelente precisión de OCR a bajas tasas, lo que brinda confianza cuando se trabaja con tipos de células inactivas, como las células T vírgenes.
• Análisis de alta sensibilidad de tan solo 5000 células por pocillo con la placa de 96 pocillos.
• Compatible con placa XF Pro M para reducir el efecto de borde.
• Sistema de inyección de cuatro puertos con función de mezcla automatizada para evaluar respuestas celulares inmediatas a sustratos, inhibidores y otros compuestos en tiempo real.
• Rendimiento verificado del instrumento para garantizar la consistencia de los datos intraplaca e interplaca.
• Amplia temperatura ambiente de operación de 4 a 30 °C, lo que permite que el analizador mantenga una temperatura de ensayo interna de 16 a 42 °C.
• Software Advanced Pro Controller para una fácil creación de protocolos de ensayo con una interfaz guiada por el usuario.
• Vista de calidad de datos en el software Wave Pro para el marcado automatizado de valores atípicos.
• Monitorea la bioenergética de células vivas, en tiempo real, en una microplaca.
Las dos vías principales para producir energía, la respiración mitocondrial y la glucólisis, implican el consumo celular de oxígeno y la salida de protones, respectivamente. La tecnología Seahorse XF utiliza sensores sin etiquetas para detectar cambios extracelulares en estos analitos con el fin de medir las tasas de respiración celular, la glucólisis y la producción de ATP. Las células se siembran en los pocillos de ensayo de la microplaca XF de 96 pocillos personalizada con una confluencia del 50-90%. Las celdas de suspensión están unidas al fondo del pozo para maximizar la sensibilidad.
• Forma una microcámara y calcula las tasas de flujo extracelular en minutos.
El instrumento baja las sondas de cartucho a los pocillos de ensayo. Los sensores se colocan 200 micrones por encima de los fondos de los pozos, formando microcámaras transitorias de aproximadamente 2 microlitros. A medida que cambian los niveles de oxígeno y pH, el instrumento lee los cambios en los sensores. Las mediciones generalmente se realizan durante 3 minutos y las tasas se calculan automáticamente. Una vez finalizado este período de medición, las sondas se elevan, lo que permite que el medio extracelular vuelva a las condiciones de referencia.
• Inyecta hasta 4 compuestos para probar respuestas o interrogar biología en tiempo real
El cartucho del sensor también contiene puertos (4 por pocillo) para permitir la inyección de moduladores en los pocillos de células durante el ensayo. Cuando lo especifica el protocolo del instrumento, el sistema inyecta el compuesto «A» en los pocillos de ensayo y realiza un paso de mezcla suave para garantizar la distribución del compuesto en todo el medio de ensayo. Todos los pozos se procesan de esta manera simultáneamente. Los ciclos de medición subsiguientes, las inyecciones adicionales especificadas por el protocolo y los cálculos de velocidad se realizan automáticamente.
La bioenergética impulsa todos los procesos biológicos, siendo el metabolismo celular el orquestador central de la función biológica y la salud celular. Los programas metabólicos son indicadores clave de la función celular saludable; también son un poderoso predictor del desempeño celular en modelos de enfermedades in vitro. Los programas metabólicos también se pueden sintonizar en el descubrimiento de fármacos, mediante la modulación de objetivos, señales y sustratos metabólicos, para restablecer un fenotipo saludable o para optimizar y mejorar el rendimiento celular.
La plataforma Agilent Seahorse XF mide las dos vías metabólicas principales, la respiración mitocondrial y la glucólisis, de células vivas en tiempo real, para proporcionar mediciones cinéticas funcionales de la bioenergética celular. La plataforma XF ofrece a los investigadores la flexibilidad de personalizar experimentos para abordar preguntas de investigación específicas o utilizar kits y ensayos Agilent Seahorse XF para soluciones llave en mano en un flujo de trabajo simplificado.
Las mediciones cuantitativas y cualitativas del metabolismo celular en tiempo real mediante la tecnología Agilent Seahorse XF proporcionan conocimientos más profundos sobre procesos que incluyen la proliferación, diferenciación, muerte celular y activación.
Los programas metabólicos son determinantes ascendentes de los resultados de las células inmunitarias. Los procesos de las células inmunitarias, incluida la activación, la proliferación y el desarrollo de la memoria, están impulsados por la reprogramación metabólica, que puede modularse para mejorar el rendimiento.
Los avances en las herramientas de análisis celular pueden ayudarlo a comprender más profundamente el resultado funcional de las estrategias de modulación, para que pueda desarrollar terapias seguras y efectivas.
La tecnología Agilent Seahorse XF permite medir el metabolismo cinético y funcional de las células inmunitarias vivas para obtener una imagen completa de los procesos celulares a medida que ocurren. Se utiliza para:
– Obtener una ventana temprana a los requisitos metabólicos, la señalización, las vías y los puntos de control.
– Optimizar los métodos de fabricación de células.
– Desarrollar productos de inmunoterapia seguros y eficaces utilizando estrategias de ingeniería celular.
– Mejorar la inmunidad antitumoral mediante estrategias de bloqueo de puntos de control de células inmunitarias.
– Tomar decisiones informadas sobre posibles objetivos terapéuticos.
En los últimos años, los avances en las tecnologías para medir el metabolismo celular han transformado el panorama de la terapia contra el cáncer. Ahora se acepta ampliamente que el metabolismo es un impulsor crítico de la malignidad del cáncer, y la proliferación de células cancerosas comúnmente requiere una regulación positiva o un «cambio metabólico» hacia una vía más glucolítica y un «efecto Warburg» para alimentar los rápidos requerimientos de energía y generar componentes básicos para el cáncer. crecimiento celular.
Las mediciones metabólicas también han demostrado que las estrategias y dependencias del cáncer no siempre son predecibles. Por ejemplo, algunos subconjuntos de cáncer van más allá de la glucólisis y pueden tener la versatilidad de alternar entre la glucólisis y la respiración mitocondrial o utilizar ambas a través de la plasticidad metabólica; mientras que otros cánceres pueden depender más de la respiración mitocondrial. Comprender los impulsores metabólicos expone esas vulnerabilidades al cáncer, para revelar vías intermedias y posibles objetivos farmacológicos para desarrollar tratamientos contra el cáncer seguros y eficaces.
Seahorse XF para describir:
– Fenotipado metabólico para diferenciar entre células sanas y células cancerosas, que característicamente exhiben un metabolismo desregulado.
– Dependencias y vulnerabilidades del cáncer, incluidos los intermediarios de señalización o vías y los requisitos de sustrato, para avanzar en el descubrimiento terapéutico a través de la identificación y validación de objetivos farmacológicos.
– Estrategias de inmunooncología e inmunoterapia para desarrollar productos de terapia celular seguros y eficaces para persistir y mantener la destrucción de las células cancerosas en el microambiente del tumor.
– La tecnología Agilent Seahorse XF proporciona mediciones funcionales críticas de las dos vías metabólicas principales, la glucólisis y la fosforilación oxidativa, para células vivas en tiempo real para una comprensión más profunda de la biología de las células cancerosas. La plataforma Seahorse XF ofrece a los investigadores la flexibilidad de personalizar experimentos para abordar preguntas de investigación específicas y aprovechar los kits y ensayos Agilent Seahorse XF para obtener soluciones llave en mano en un flujo de trabajo simplificado.
El panorama de los descubrimientos terapéuticos está evolucionando rápidamente y el metabolismo celular se ha convertido en el motor fundamental de una variedad de enfermedades comunes. La biología celular funciona como una red de señalización, vías y puntos de control, con el metabolismo celular como orquestador central para alimentar muchos procesos celulares.
El desarrollo de fármacos seguros y eficaces requiere una comprensión de los genes, las proteínas y las vías que pueden ser intermediarios clave y candidatos potenciales para la intervención farmacológica. Los procesos celulares son dinámicos y los programas metabólicos son los determinantes anteriores de los resultados celulares. La identificación y validación de posibles objetivos farmacológicos requiere una visión integral de los impulsores previos para modular la respuesta celular e intervenir de forma segura y eficaz. Se utiliza mediciones metabólicas en modelos de enfermedades, ensayos de fenotipo, identificación y validación de objetivos, mecanismos de acción y descubrimiento de drogas potenciales.
La tecnología Agilent Seahorse XF proporciona mediciones metabólicas funcionales de células vivas para una medición más directa y una comprensión más profunda de los procesos celulares. La tecnología Seahorse XF simplifica su interpretación al medir indicadores clave de los impulsores metabólicos celulares.
